​生物制药微课堂|第二期-宿主细胞残留蛋白如何分析？5分钟了解国际前沿                                                                 关注我们，更多干货和惊喜好礼
本期放送
上一场微课堂，为您详解了：单克隆抗体肽图分析的挑战及方案，本期，让我们来谈谈生物制药中绕不开的难点话题：宿主细胞残留蛋白分析。
什么是微课堂：
为了更好地服务中国生物制药企业接轨国际前沿法规与趋势，赛默飞开启名为: leaders in biopharmaceutical characterization and control的系列微课堂，为您带来最前沿的生物药表征与质控的zui佳实践，一探生物药“创新”与“质量”的世界前沿。”
host cell proteins: analyzing impurity in biopharmaceuticals
讲师介绍
amy claydon博士是赛默飞生物制药客户解决方案中心高级应用科学家。在此之前，amy担任克劳福德科学公司（crawford scientific）的技术顾问，为来自众多行业的分析人员开设了色谱和质谱多方面的课程。在获得博士学位之后，艾米还在利物浦大学（university of liverpool）担任了近5年的博士后研究员，主要方向为使用稳定同位素标记和orbitrap技术应用于蛋白质组学动态变化研究。
5min速览版：
为了方便您快速掌握微课堂咨询与要点信息，我们特地总结了5min速览版。当然，如果您想深入了解课程精髓，不错过原汁原味的国际专家分享，推荐您一定要观看完整版微课堂。
看点:宿主细胞残留蛋白分析的难点及解决方案
通过工程细胞重组技术生产的生物制品，在宿主细胞表达目标蛋白的同时，宿主细胞本身的蛋白质也会部分表达，产生相关杂质。残留的宿主细胞蛋白质(hcp)可能导致患者出现不可预测的免疫反应，因此需要通过工艺纯化使得终产品中的hcp的残留量尽可能低（<100ppm），并建立良好的方法来检测hcp。酶联免疫吸附试验（elisa）是目前hcp检测的常见方法，然而开发特定工艺的专用elisa试剂非常耗时（六个月以上）且开发成本昂贵，并只能测定hcp总量，而不能对每种蛋白进行鉴定和定量。其次，通用的elisa试剂盒的专属性差，无法完全覆盖样品中全部hcp种类。lc/ms由于高分辨高灵敏度等优异性能，可对生物制品中的hcp进行全面鉴定和定量分析（定量下限可达1ppm以内，动态范围5-6个数量级）。对于生物制药而言，使用更加先进准确的分析方法，获得更加准确可靠的数据是至关重要的，更有助于通过申报与审批。
难点
lc/ms分析hcp最主要的难点在于结果的重现性和可靠性，要求高效液相及高分辨质谱本身具有的良好的重现性，在数据分析上也要进行严格筛选，三次重复实验中至少两次鉴定到该蛋白，且unique peptide≥2。此次报告中提出了一套完整的hcp分析方法流程：使用lilly礼来[1]的非变性蛋白酶解方法，将抗体和杂蛋白分离(smart digest试剂盒及kingfisher能够严格控温、且前处理高效)；高效液相色谱（使用常规液相即可得到理想的结果）及质谱的高度重现性使鉴定结果更加准确，proteome discoverer严格的数据筛选及biopharma finder深度表征分析，可定量<1ppm的蛋白，且重现性良好。
赛默飞hcp鉴定和定量方案
（点击查看大图）
液相重现性良好：8针vs18针进样
（点击查看大图）
如果使用orbitrap高分辨质谱平台exploris 480，能够实现鉴定灵敏度及动态范围的进一步提高。那么如何进行合理的实验设计？质谱方法的参数设置？鉴定结果可做到什么程度？这些问题都会在此次报告中给出答案，精彩不要错过！
nist mab ms2 data acquired from exploris 480
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参考文献：
1. a novel sample preparation for shotgun proteomics characterization of hcps in antibodies. anal chem. 2017 may 16;89(10):5436-5444.
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