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组织金属蛋白酶抑制因子1(TIMP1)ELISA试剂盒说明书和原理

2019-7-12 6:54:13发布6次查看ip:发布人:

l  本试剂盒用于体外定量检测血清、血浆、组织、细胞上清及相关液体样本中组织金属蛋白酶抑制因子1(timp1)的含量。
l  有效期:6个月
l  保存条件:2-8℃
组织金属蛋白酶抑制因子1(timp1)elisa试剂盒实验原理
试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验(elisa)。往预先包被组织金属蛋白酶抑制因子1(timp1)捕获抗体的包被微孔中,依次加入标本、标准品、hrp标记的检测抗体,经过温育并彻底洗涤。用底物tmb显色,tmb在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的组织金属蛋白酶抑制因子1(timp1)呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度(od 值),计算样品浓度。
组织金属蛋白酶抑制因子1(timp1)elisa试剂盒样本处理及要求
1.  血清:全血标本请于室温放置2小时或4℃过夜后于1000g离心20分钟,取上清即可检测,或将标本放于-20℃或-80℃保存,但应避免反复冻融。
2.  血浆:可用edta或肝素作为抗凝剂,标本采集后30分钟内于2 - 8°c 1000g离心20分钟,或将标本放于-20℃或-80℃保存,但应避免反复冻融。
3.  细胞培养物上清或其它生物标本:1000g离心20分钟,取上清即可检测,或将标本放于-20℃或-80℃保存,但应避免反复冻融。
注:标本溶血会影响最后检测结果,因此溶血标本不宜进行此项检测。
需要而未提供的试剂和器材
1.     酶标仪(450nm)
2.     高精度加样器及枪头:0.5-10ul、2-20ul、20-200ul、200-1000ul
3.     37℃恒温箱
4.     蒸馏水或去离子水
组织金属蛋白酶抑制因子1(timp1)elisa试剂盒问题解析:
1.试剂的选择:选择优良试剂大家都是知道的,但是在检测之前还应该提前半个小时将试剂拿到常温下进行解冻。
2.加样中可能遇到的问题:在做血清或是血浆用于检测试剂的时候,会碰到血清血浆不好分离的情况,这个时候的解决办法是先放在常温中1到2小时,然后在进行离心处理
3.洗板时容易造成误差: 因为洗板是人工洗的,所以判断什么时候洗干净了也是人为判断的,这个时候带有主观色彩,所以多清洗几次,还有就是在洗的时候孔与孔之间的液体容易交叉流动
4.显色问题: 使用了过期的显色剂或者是显色剂用过后放置时间太长,都有可能造成显色剂不显色。所以在进行显色反应的时候,要先查看显色剂本身的情况
5.终止反应:在加终止剂的时候由于倾倒速度快,差生气泡,造成假阳性结果。所以在倒终止剂的时候要缓慢倒
6.读板:读板的时候首先应该保证板的清洁干净
试剂准备
试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡后方可使用。
20×洗涤缓冲液的稀释:蒸馏水按1:20稀释,即1份20×洗涤缓冲液加19份蒸馏水。
操作步骤
1.  从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条,剩余板条用自封袋密封放回4℃。
2.  设置标准品孔和样本孔,标准品孔各加不同浓度的标准品50μl;
3.  样本孔中加入待测样本50μl;空白孔不加。
4.  除空白孔外,标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶(hrp)标记的检测抗体100μl,用封板膜封住反应孔,37℃水浴锅或恒温箱温育60min。
5.  弃去液体,吸水纸上拍干,每孔加满洗涤液(350μl),静置1min,甩去洗涤液,吸水纸上拍干,如此重复洗板5次(也可用洗板机洗板)。
6.  每孔加入底物a、b各50μl,37℃避光孵育15min。
7.  每孔加入终止液50μl,15min内,在450nm波长处测定各孔的od值。
实验结果计算
以所测标准品的od值为横坐标,标准品的浓度值为纵坐标,在坐标纸上或用相关软件绘制标准曲线,并得到直线回归方程,将样品的od值代入方程,计算出样品的浓度。
试剂盒性能
1.  特异性:不与其它可溶性结构类似物交叉反应。
2.  重复性:板内变异系数小于10% ,板间变异系数小于15% 。
注释:本公司所有产品仅用于科研,不得用于临床。
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